ABTS esszé
Ez egy analitikai módszer, amely spektrofotometriás mérést alkalmaz a minta antioxidáns kapacitásának meghatározására. UV-Vis spektrofotométer alkalmazásával mérjük az ABTS + + csoportot tartalmazó oldat abszorbanciáját, amelyet az ABST (2, 2'-azinobisz (3-etil-benzotiazolin-6-szulfonát)) színtelen anyag formájában történő oxidálásával állítunk elő. a radikálisokat a látható tartományban a hullámhossz-jellemzőkkel történő elnyeléssel színezzük. Az antioxidáns molekulák ABTS + + oldatának hozzáadása, amely mind a hidrogén, mind az elektron átadásával hat, meghatározza a gyök színtelen formájú redukcióját, ennek következtében a reakcióelegy elszíneződött. Ez a fehérítés, amely arányos a jelenlévő antioxidáns mennyiségével, mérhető az abszorbanciás csökkenése egy bizonyos idő alatt egy meghatározott hullámhosszon (734 nm). a referencia standardként választott antioxidáns molekula ismert mennyiségeire mért abszorbancia értékek, amelyek általában aszkorbinsav vagy Trolox (ebben az esetben a TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Kapacitás antioxidáns aktivitásáról beszélünk.
Az ABTS használatán alapuló antioxidáns teljesítménymérés előnye, hogy egyszerű és gyors. Ezenkívül lehetővé teszi az antioxidáns anyagok hidrofil és lipofil mérését széles pH tartományban. Ugyanakkor szem előtt kell tartani, hogy az alkalmazott radikális (ABTS + +) nem fiziológiai, és nincs jelen a biológiai rendszerekben, és hogy a különböző antioxidánsok reakciókinetikája miatt a mérés megismételhetőségével kapcsolatos problémák gyakran kiemelkednek.
FRAP (ferrit redukáló antioxidáns teljesítmény)
A FRAP teszt az antioxidánsok vas-ionokkal szembeni redukáló képességét méri. Az elektronátvitelen alapuló módszer, amelyben a vasionok Fe3 + -ról Fe2 + -ra jutnak. Bizonyos pH (3, 6) és TPTZ (2, 4, 6-trisz (2-piridil) -s-triazin) jelenlétében ezek az ionok különböző tulajdonságokkal rendelkező komplexeket képeznek, különösen a csökkentett származékot (Fe2 + -TPTZ) egy kék színt feltételez, amelynek maximális abszorpciója 593 nm-en van, amit spektrofotometriásan mérhetünk. Az antioxidáns anyag redukáló kapacitását ezért mérhetjük az oxidálószert tartalmazó oldat abszorbanciájának változásaként a standardhoz viszonyított változással összehasonlított hullámhosszon (például aszkorbinsav).
A FRAP tesztet úgy tervezték meg, hogy mérje a plazma redukáló teljesítményét, de aztán a tiszta vegyületek és komplex mátrixok antioxidáns kapacitásának vizsgálatára adaptálták. Valójában, mivel ez a módszer lehetővé teszi, hogy csak a redukáló kapacitást értékeljük elektronátvitel útján, teljesen figyelmen kívül hagyva az antioxidánsok hatását, amelyek hidrogénátvitel útján hatnak, nem teszi lehetővé az antioxidáns szerepet játszó molekulák, például tiolok és fehérjék mérésének mérését. alapvető fontosságú a biológiai folyadékokban (pl. vér). Ennek az eljárásnak az az előnye, hogy az egyik legegyszerűbb, leggyorsabb és legolcsóbb módszer az antioxidáns kapacitás meghatározására in vitro.
DPPH teszt
A 2, 2-difenil-1-pikil-hidrazil (DPPH •) egy nagyon stabil és kereskedelmi forgalomban kapható nitrogéncsoport, amelyet intenzív, lila-vörös szín jellemez, amely antioxidáns kapacitású molekula jelenlétében redukálva csökken. Az antioxidáns vegyülettel való reakció után a DPPH-oldat abszorbanciájának 517 nm-en történő spektrofotometriás mérésével lehetséges a vizsgálandó anyag redukáló kapacitásának számszerűsítése, függetlenül attól, hogy hidrogénátvitel vagy elektronátvitel hatására működik. Az eredményt általában IC50-ben fejezzük ki, azaz az antioxidáns mennyiségét, amely képes a kezdeti DPPH-koncentráció 50% -kal csökkentésére.
Ez egy gyors, egyszerű és olcsó módszer. Ennek az analitikai technikának a korlátait az adja, hogy az analízis eredményei torzulnak abban az esetben, amikor a vizsgált molekulák a DPPH-radikális hullámhossztartomány tartományában elnyelődnek, vagy sztérikusan nagy mennyiségű molekulák jelenlétében, amelyek nem reagálnak a radikális reaktív részével. Ez okozza, hogy a DPPH antioxidánsokkal 1000-szer lassabban reagáljon, mint a peroxilcsoport.
PCL TESZT (fotokémilumineszcencia)
A PCL-teszt egy adott radikális faj, az UV-sugárzással fotokémiai úton előállított szuperoxid-anion (O2 • -) reakcióján alapul, kemilumineszcenciát kibocsátó vegyülettel. A felhasznált marker a luminol, a szabad gyökök által oxidált molekula olyan fényt bocsát ki, amely egy speciális műszerrel (Photochem®) mérhető. Az antioxidáns anyagok jelenléte a keverékben dezaktiválja a kemilumineszcencia kibocsátását gátló radikális fajokat. A PCL-analízis nagyon gyors és érzékeny. Továbbá, két különböző analitikai protokoll alkalmazásával, az ACW (antioxidáns kapacitás vízoldható) és ACL (antioxidáns kapacitás lipid oldható) alkalmazásával, a vízben oldódó komponens (flavonoidok, E-vitamin) teljes antioxidáns kapacitásához való hozzájárulás mérhető ugyanarra a vegyületre. C, aminosavak, stb.), Mint a zsírban oldódó (tokoferolok, tokotrienolok, karotinoidok stb.). A vizsgált termék antioxidáns kapacitását úgy állítjuk elő, hogy összehasonlítjuk a standard referencia molekulákkal, az ACL protokollhoz tartozó aszkorbinsavval és az ACW protokollhoz tartozó Trolox mérésekkel rögzített értékeket.
